مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعہ مقداری تجزیہ کے اصول اور طریقے

مائع کرومیٹوگرافی کی علیحدگی کا طریقہ کار دو مرحلوں کے لیے مرکب میں اجزاء کے تعلق کے فرق پر مبنی ہے۔

مختلف اسٹیشنری مراحل کے مطابق، مائع کرومیٹوگرافی کو مائع-ٹھوس کرومیٹوگرافی، مائع- مائع کرومیٹوگرافی اور بانڈڈ فیز کرومیٹوگرافی میں تقسیم کیا گیا ہے۔سب سے زیادہ استعمال شدہ مائع ٹھوس کرومیٹوگرافی ہیں جس میں سلیکا جیل فلر کے طور پر اور بانڈڈ فیز کرومیٹوگرافی مائیکروسیلیکا کے ساتھ میٹرکس کے طور پر ہے۔

اسٹیشنری مرحلے کی شکل کے مطابق، مائع کرومیٹوگرافی کو کالم کرومیٹوگرافی، پیپر کرومیٹوگرافی اور پتلی پرت کی کرومیٹوگرافی میں تقسیم کیا جاسکتا ہے۔جذب کرنے کی صلاحیت کے مطابق، اس کو ادسورپشن کرومیٹوگرافی، پارٹیشن کرومیٹوگرافی، آئن ایکسچینج کرومیٹوگرافی اور جیل پارمیشن کرومیٹوگرافی میں تقسیم کیا جا سکتا ہے۔

حالیہ برسوں میں، مائع کالم کرومیٹوگرافی کے نظام میں ایک ہائی پریشر مائع بہاؤ کا نظام شامل کیا گیا ہے تاکہ علیحدگی کے اثر کو بہتر بنانے کے لیے ہائی پریشر کے تحت موبائل فیز کو تیزی سے بہاؤ، اس لیے اعلی کارکردگی (جسے ہائی پریشر بھی کہا جاتا ہے) مائع کرومیٹوگرافی ابھرا ہے.

حصہ
01 مائع کرومیٹوگرافی کے مقداری تجزیہ کا اصول

معیار کی بنیاد پر مقدار کا تعین کرنے کے لیے، معیار کے طور پر خالص مادوں کی ضرورت ہوتی ہے۔

مائع کرومیٹوگرافی کی مقدار کا تعین ایک نسبتاً مقداری طریقہ ہے: یعنی مرکب میں تجزیہ کار کی مقدار کا اندازہ خالص معیاری نمونے کی معلوم مقدار سے لگایا جاتا ہے۔

حصہ
02 مائع کرومیٹوگرافی کے ذریعہ مقدار کے تعین کی بنیاد

ماپا جزو (W) کی مقدار رسپانس ویلیو (A) (چوٹی کی اونچائی یا چوٹی کا علاقہ)، W=f×A کے متناسب ہے۔

مقداری اصلاحی عنصر (f): یہ مقداری حساب کے فارمولے کا تناسب مستقل ہے، اور اس کا جسمانی معنی ماپا جزو کی مقدار ہے جس کی نمائندگی یونٹ رسپانس ویلیو (چوٹی ایریا) سے ہوتی ہے۔

مقداری تصحیح کا عنصر معیاری نمونے کی معلوم مقدار اور اس کے جوابی قدر سے حاصل کیا جا سکتا ہے۔

نامعلوم جزو کی رسپانس ویلیو کی پیمائش کریں، اور جز کی مقدار مقداری اصلاحی عنصر سے حاصل کی جا سکتی ہے۔

حصہ
03 مقداری تجزیہ میں عام اصطلاحات

نمونہ (نمونہ): ایک حل جس میں کرومیٹوگرافک تجزیہ کے لیے تجزیہ کار ہوتا ہے۔معیاری اور نامعلوم نمونوں میں تقسیم۔

معیاری: معلوم ارتکاز کے ساتھ ایک خالص مصنوعات۔نامعلوم نمونہ (نامعلوم): وہ مرکب جس کی ارتکاز کو جانچنا ہے۔

نمونے کا وزن: نمونے کا اصل وزن جس کی جانچ کی جائے گی۔

Dilution: نامعلوم نمونے کی کمزوری کا عنصر۔

اجزاء: مقداری تجزیہ کرنے کے لیے کرومیٹوگرافک چوٹی، یعنی وہ تجزیہ کار جس کا مواد نامعلوم ہے۔

اجزاء کی مقدار (رقم): مادہ کا مواد (یا ارتکاز) جس کی جانچ کی جائے گی۔

انٹیگرٹی : کمپیوٹر کے ذریعے کرومیٹوگرافک چوٹی کے چوٹی کے علاقے کی پیمائش کا کمپیوٹیشنل عمل۔

کیلیبریشن وکر: اجزاء کے مواد کا ایک لکیری منحنی خطوط بمقابلہ رسپانس ویلیو، معیاری مادہ کی معلوم مقدار سے قائم کیا جاتا ہے، جو تجزیہ کار کے نامعلوم مواد کا تعین کرنے کے لیے استعمال ہوتا ہے۔

حصہ
04 مائع کرومیٹوگرافی کا مقداری تجزیہ

1. مقداری تجزیہ کے لیے موزوں کرومیٹوگرافک طریقہ منتخب کریں:

l دریافت شدہ جزو کی چوٹی کی تصدیق کریں اور 1.5 سے زیادہ ریزولوشن (R) حاصل کریں۔

l آزمائشی اجزاء کی کرومیٹوگرافک چوٹیوں کی مستقل مزاجی (پاکیزگی) کا تعین کریں۔

l طریقہ کا پتہ لگانے کی حد اور مقدار کی حد کا تعین کریں۔حساسیت اور لکیری رینج

2. مختلف ارتکاز کے معیاری نمونوں کے ساتھ انشانکن وکر قائم کریں۔

3. مقداری طریقوں کی درستگی اور درستگی کو چیک کریں۔

4. نمونہ جمع کرنے، ڈیٹا پروسیسنگ اور رپورٹ کے نتائج کو نافذ کرنے کے لیے متعلقہ کرومیٹوگرافی مینجمنٹ سوفٹ ویئر کا استعمال کریں

حصہ
05 مقداری چوٹیوں کی شناخت (معیاری)

مقدار کے لحاظ سے ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کی شناخت کریں۔

سب سے پہلے، معیاری نمونہ استعمال کریں تاکہ مقدار درست کرنے کے لیے کرومیٹوگرافک چوٹی کے برقرار رکھنے کے وقت (Rt) کا تعین کریں۔برقرار رکھنے کے وقت کا موازنہ کرتے ہوئے، نامعلوم نمونے میں ہر کرومیٹوگرافک چوٹی سے متعلقہ جزو تلاش کریں۔کرومیٹوگرافک کوالیٹیٹو طریقہ یہ ہے کہ برقرار رکھنے کے وقت کا معیاری نمونے سے موازنہ کیا جائے۔معیار ناکافی ہے۔مزید تصدیق (معیاری)

1. معیاری اضافے کا طریقہ

2. ایک ہی وقت میں دوسرے طریقے استعمال کریں: دوسرے کرومیٹوگرافک طریقے (میکانزم کو تبدیل کریں، جیسے: مختلف کرومیٹوگرافک کالموں کا استعمال کرتے ہوئے)، دوسرے ڈٹیکٹر (PDA: سپیکٹرم موازنہ، سپیکٹرم لائبریری کی تلاش؛ MS: ماس سپیکٹرم تجزیہ، سپیکٹرم لائبریری کی تلاش)

3. دیگر آلات اور طریقے

حصہ
06 مقداری چوٹی مستقل مزاجی کی تصدیق

کرومیٹوگرافک چوٹی مستقل مزاجی (پاکیزگی) کی تصدیق کریں

اس بات کو یقینی بنائیں کہ ہر کرومیٹوگرافک چوٹی کے نیچے صرف ایک ماپا جزو ہے۔

ہم آہنگی پیدا کرنے والے مادوں (تعفن) سے مداخلت کی جانچ کریں

کرومیٹوگرافک چوٹی مستقل مزاجی (پاکیزگی) کی تصدیق کے طریقے

فوٹوڈیوڈ میٹرکس (PDA) ڈیٹیکٹر کے ساتھ سپیکٹروگرام کا موازنہ کرنا

چوٹی کی پاکیزگی کی شناخت

2996 پیوریٹی اینگل تھیوری

حصہ 07 میں عام طور پر استعمال ہونے والے مقداری طریقے

معیاری منحنی طریقہ، بیرونی معیاری طریقہ اور اندرونی معیاری طریقہ میں تقسیم:

1. بیرونی معیاری طریقہ: مائع کرومیٹوگرافی میں سب سے زیادہ استعمال ہوتا ہے۔

معیاری نمونوں کے طور پر جانچنے کے لیے مرکبات کے خالص نمونوں کا استعمال کرتے ہوئے معلوم ارتکاز کے معیاری نمونوں کی ایک سیریز تیار کی گئی۔کالم میں اس کی رسپانس ویلیو (چوٹی کا علاقہ) تک انجکشن لگایا جاتا ہے۔
ایک مخصوص رینج کے اندر، معیاری نمونے کے ارتکاز اور ردعمل کی قدر کے درمیان ایک اچھا لکیری تعلق ہے، یعنی W= f×A، اور ایک معیاری وکر بنایا جاتا ہے۔

بالکل اسی تجرباتی حالات کے تحت، ناپے جانے والے جزو کی رسپانس ویلیو حاصل کرنے کے لیے نامعلوم نمونے کو انجیکشن لگائیں۔معلوم گتانک f کے مطابق، ماپا جانے والے اجزاء کا ارتکاز حاصل کیا جا سکتا ہے۔

بیرونی معیاری طریقہ کے فوائد:سادہ آپریشن اور حساب کتاب، یہ عام طور پر استعمال ہونے والا مقداری طریقہ ہے۔ہر ایک جزو کا پتہ لگانے اور اس کو ختم کرنے کی ضرورت نہیں ہے۔معیاری نمونہ کی ضرورت ہے؛معیاری نمونے اور نامعلوم نمونے کی پیمائش کی شرائط یکساں ہونی چاہئیں۔انجکشن کا حجم درست ہونا چاہئے.

بیرونی معیاری طریقہ کار کے نقصانات:تجرباتی حالات کا زیادہ ہونا ضروری ہے، جیسے پکڑنے والے کی حساسیت، بہاؤ کی شرح، اور موبائل فیز کی ساخت کو تبدیل نہیں کیا جا سکتا۔ہر انجکشن کے حجم میں اچھی تکرار کی صلاحیت ہونی چاہئے۔

2. اندرونی معیاری طریقہ: درست، لیکن پریشان کن، معیاری طریقوں میں سب سے زیادہ استعمال ہوتا ہے۔

داخلی معیار کی ایک معلوم مقدار کو مخلوط معیار بنانے کے لیے معیار میں شامل کیا جاتا ہے، اور معلوم ارتکاز کے کام کے معیارات کی ایک سیریز تیار کی جاتی ہے۔مخلوط معیار میں معیاری اور اندرونی معیار کا داڑھ کا تناسب بدستور برقرار ہے۔کرومیٹوگرافک کالم میں انجیکشن لگائیں اور رسپانس ویلیو کے طور پر (معیاری نمونہ چوٹی کا علاقہ/اندرونی معیاری نمونہ چوٹی کا علاقہ) لیں۔رسپانس ویلیو اور ورکنگ اسٹینڈرڈ کے ارتکاز کے درمیان لکیری تعلق کے مطابق، یعنی W= f×A، ایک معیاری وکر بنایا جاتا ہے۔

اندرونی معیار کی ایک معلوم مقدار نامعلوم نمونے میں شامل کی جاتی ہے اور ناپے جانے والے اجزاء کی جوابی قیمت حاصل کرنے کے لیے کالم میں داخل کی جاتی ہے۔معلوم گتانک f کے مطابق، ماپا جانے والے اجزاء کا ارتکاز حاصل کیا جا سکتا ہے۔

اندرونی معیاری طریقہ کی خصوصیات:آپریشن کے دوران، نمونہ اور اندرونی معیار کو ایک ساتھ ملایا جاتا ہے اور کرومیٹوگرافک کالم میں انجکشن لگایا جاتا ہے، لہذا جب تک مخلوط محلول میں اندرونی معیار سے ماپا جزو کی مقدار کا تناسب مستقل ہے، نمونے کے حجم میں تبدیلی مقداری نتائج کو متاثر نہیں کرے گا۔.اندرونی معیاری طریقہ نمونے کے حجم، اور یہاں تک کہ موبائل فیز اور ڈیٹیکٹر کے اثر و رسوخ کو دور کرتا ہے، لہذا یہ بیرونی معیاری طریقہ سے زیادہ درست ہے۔

حصہ
08 مقداری تجزیہ کے نتائج کو متاثر کرنے والے عوامل

خراب درستگی کی وجہ سے ہو سکتا ہے:

چوٹی کے علاقے کا غلط انضمام، نمونے کی تیاری کے دوران نمونے کی سڑن یا نجاست متعارف کروائی گئی، نمونے کی شیشی پر مہر بند نہیں، نمونہ یا سالوینٹ اتار چڑھاؤ، نمونے کی غلط تیاری، نمونے کے انجیکشن کے مسائل، غلط داخلی معیاری تیاری

خراب درستگی کی ممکنہ وجوہات:

چوٹی کا غلط انضمام، انجیکشن یا انجیکٹر کے مسائل، نمونے کی تیاری کے دوران نمونے کی سڑن یا نجاست متعارف کروائی گئی، کرومیٹوگرافک مسائل، انحطاطی ڈیٹیکٹر ردعمل